标签抗体的使用方法

	方法	目的
检测	· 免疫印迹 · 免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP） · 免疫染色（IC、IH） · 流式细胞术（FCM）	· 确认有无表达 · 分析与标签融合蛋白结合的因子（Co-IP） · 细胞内定位
			纯化	使用抗原抗体 反应进行纯化	· 分析相互作用的蛋白质（Pull down实验） · 分析晶体结构 · 用于制备免疫原 · 激酶测定

 

检测方法

 

 

<使用标签抗体进行免疫印迹>

 

 

 

<使用标签抗体进行免疫染色>

 

纯化蛋白的使用目的

 

<通过激酶测定进行功能分析>

 

<分析相互作用蛋白质>

 

<用于免疫原>

 

<分析晶体结构>

使用标签/标签抗体时的优点和缺点

 

优点

由于标签序列通常不是来自动物细胞的序列，所以标签抗体很少出现非特异性反应，且通常具有高反应性。

 

在缺少针对目的蛋白的特异性抗体的情况下，可以使其作为标签融合蛋白在细胞中表达，并观察其定位。

 

可以使用一种标签抗体对具有相同标签的多种蛋白质进行检测和纯化。

 

纯化标签融合蛋白后，可以使用特定的蛋白酶去除标签，保留目的蛋白。

 

通过融合两个标签并分两个阶段进行纯化可以提高纯度。

 

使用目的蛋白特异性抗体进行免疫共沉淀时，该抗体可能会抑制与其他蛋白的结合，但通过使用标签或标签抗体可以避免此类情况发生。

 

通过添加标签，在一些情况下，可以使不溶性蛋白质变为可溶。

 

使用荧光蛋白作为标签时，可以观察到活细胞中蛋白质的定位。

缺点

表达的标签融合蛋白是人为操作的，可能无法模拟生物体内的实际情况。

 

标签的不同融合位置（N端，C端等），可能影响蛋白质的结构并使目的蛋白失去活性。

 

在一个实验系统中使用多个标签融合蛋白时，有必要确保标签类型不重叠。